15-17 июня
Онлайн-семинар «Ошибки и проблемы высокоэффективной жидкостной хроматографии (hplctroubleshooting
Участие в семинаре бесплатное, регистрация обязательна. Семинар проводится для сотрудников фармацевтических предприятий Калужской области
15-17 июня 2020 год "Ошибки и актуальные проблемы ВЭЖХ" время с 9:00 до 17:00 по московскому времени

Тренер: Кейтлин Илья Михайлович, кандидат фармацевтических наук, группа компаний «Виалек»

В материалах семинара использована современная информация по ошибкам и актуальным проблемам высокоэффективной жидкостной хроматографии, с которыми часто встречаются специалисты в своей работе. Семинар проводит специалист, кандидат фармацевтических наук, с многолетним опытом работы в области высокоэффективной жидкостной хроматографии в исследовательской лаборатории по разработке новых лекарственных средств одной из крупнейших фармацевтических компаний мира. Материалы семинара включают в себя большое количество практических ситуаций и снабжены иллюстративным материалом.

После окончания каждого дня семинара для желающих проводится «круглый стол» (ответы на вопросы)

Знания и методология, полученные на данном семинаре, дадут возможность специалистам предприятий:

1) повысить квалификацию и личную эффективность как специалиста;

2) уменьшить количество ошибок, допускаемых в работе из-за «пробелов» в знаниях;

3) снизить процент брака, что позволит существенно снизить затраты на повторное выполнение работы

4) значительно сэкономить средства, связанные с приобретением дорогостоящих хроматографических колонок.

5) снизить расход дорогостоящих органических растворителей, применяемых для приготовления подвижных фаз
Организаторами мероприятия являются:

  • АО «Агентство инновационного развития – центр кластерного развития Калужской области
Программа / 3 дня, 9 вебинаров
15 июня
9:00-11-30, Вебинар 1

1) основные правила подхода к проблемам высокоэффективной жидкостной хроматографии; логическое изолирование проблемы
2) стадия диагностики причины возникновения проблемы
3) метанол или ацетонитрил? проблемы выбора
4) название материала колонки: важна ли информация
5) загрязнение УФ-ячейки детектора, признаки проблемы и ее решение
6) загрязнение в инжекторе, решение проблемы
7) источники ошибок в процессе приготовления образца
8) ошибки, вызванные приготовлением подвижной фазы
9) роль температуры на возникновение проблемных ситуаций в хроматографических разделениях
10) защита колонки от загрязнений и агрессивных элюентов
11) граница пропускания растворителя в УФ-диапазоне и ошибки, связанные с использованием растворителей вблизи границы пропускания
12) системные пики, как к ним относиться

11-30-12:30, Перерыв

12-30-14-30, Вебинар 2

13) градиентное элюирование, особенности, проблемы, источники ошибок
14) примеси в элюенте при работе в градиентном режиме.
15) ультразвук, его применение в пробоподготовке. источники ошибок и проблемных ситуаций
16) химическая устойчивость компонентов хроматографа
17) проблема применения фосфатных буферов, как избежать осаждения соли из подвижной фазы
18) проблема несовместимости растворителей
19) проблемы, связанные с несовпадением состава растворителя пробы и элюента
20) проблема пиков «на обратном градиенте».
21) стрелка на колонке, указывающая направление потока. промывка колонки обратным потоком
22) проблемы длительного хранения колонок
23) проблемы ухудшения и потери эффективности и разрешения
24) рекомендуемые графики регламентных и профилактических работ.

14-30-15:00, Перерыв

15:00-17:00, Вебинар 3

25) проблема появления случайных пиков.
26) проблемы, связанные с давлением в хроматографической системе
27) проблемы, связанные с формой пиков
28) отсутствие потока подвижной фазы.
29) проблема расщепленных пиков.
30) асимметрия пика (tailing), причины проблем и решения
31) изменения в удерживании от колонки к колонке
32) проблема расширения пиков
33) проблемы базовой линии (систематический и несистематический шум, дрейф)
34) проблемы ВЭЖХ в картинках:
  • смешивание компонентов подвижной фазы;
  • рН при разделении;
  • качество тетрагидрофурана;
  • растворители образцов;
  • попадание воздуха в образец;
  • влияние температуры элюента;
  • влияние скорости потока на разделение;
  • проблемы дегазирования подвижной фазы;
  • течи в ВЭЖХ системе;
  • проблема неверного растворителя для образца;
  • коллапс колонки;
  • перегрузка колонки;
  • загрязнение колоночной фритты;
  • влияние внеколоночных эффектов на разделение;
  • защита хроматографической колонки;

35) полезные советы при решении проблемных ситуаций
36) справочник проблем ВЭЖХ:

1. высокое давление в системе;
2. отсутствие/понижение давления;
3. колебания давления;
4. неравномерность базовой линии;
5. изменения в хроматографии, связанные с временами удерживания, формой и размерами пиков:

- изменения времен удерживания от инжекции к инжекции
- постепенное повышение или понижение времен удерживания
- изменения в форме пиков
- отсутствие пиков
- пики меньше ожидаемых
- ранее выходящие пики расширенные
- все пики расширенные
- все пики дублируются
- асимметрия пиков (fronting)
- асимметрия пики (tailing)
- пики с плоскими верхушками
- отрицательные пики

6. проблемные ситуации с идентификацией веществ
7. проблемные ситуации с результатами количественного определения

37) Проблемы, связанные с давлением в хроматографической системе:

  • Расчетная оценка величины давления в хроматографической системе;
  • Высокое значение давления, применение in-line фильтров, примеры
  • Низкое значение давления
  • Нестабильность показаний давления

Ответы на вопросы в чате
16 июня
9:00-11-30, Вебинар 4,

Материалы данной части семинара (2 дня) основаны на общении со слушателями семинаров по ВЭЖХ, проблемам ВЭЖХ. приведены актуальные вопросы из практической деятельности аналитических лабораторий фармацевтических предприятий и решение проблемных ситуаций.

1) определение примесей в лекарственных препаратах: подходы к расчетам содержания
2) корректно ли использовать фармакопейную величину фактора относительного отклика
3) изменение площади пика примеси при работе в градиентной системе. проблема и решение
4) вода для ВЭЖХ, качество и мониторинг
5) идентификация примесей в новом препарате
6) особенности нормально-фазной хроматографии при разделении оптических изомеров
7) хранение колонки: как правильно перейти от нормально-фазной смеси хранения к обращенно-фазной и наоборот
8) определение примесей: насколько правильно использовать низкие значения k´
9) дрейф времен удерживания и появление фронтовой асимметрии (fronting) в режиме ион-парной хроматографии
10) тестирование и выбор хроматографических колонок, поступающих в лабораторию
11) насколько допустима разница времени удерживания стандарта и образца; отклонение времен удерживания РСО и активного вещества в испытуемом образце; какова может быть разница в величине времени удерживания стандарта и исследуемого образца
12) как правильно составить градиентную методику
13) проблемы интегрирования плохо разделенных пиков
14) дрейф времен удерживания при высокой концентрации тетрагидрофурана в подвижной фазе

11-30-12:30, Перерыв

12-30-14-30, Вебинар 5,

15) насколько корректно провести замену одного фармакопейного стандарта на другой с иным профилем примесей
16) повышенный уровень шума при определении предела количественного определения (QL) примесей
17) рефрактометрическое детектирование: площадь пика стандарта в 100 раз меньше ожидаемого значения
18) рефрактометрическое детектирование: отсутствие пиков аналитов
19) проблемы уравновешивания хроматографической системы при работе в ион-парной ВЭЖХ
20) проблемный вопрос с выбором мембранных фильтров для подвижной фазы
21) шум базовой линии, мешающий проведению анализа (работа с крупными белковыми молекулами)
22) проблема смещения времен удерживания за пределы спецификации
23) гель-фильтрационная ВЭЖХ: пик одного из веществ отсутствует
24) применение параметра «peak-to-valley ratio» для расчетов разделения
25) проблема при работе в ион-парной ВЭЖХ: дрейф времен удерживания
26) асимметрия пика аналита при трансфере методики у принимающей стороны
27) порядок инжектирования растворов стандартных образцов в хроматографических работах. термин "bracketing standard", его значение и применение
28) пояснение термина: сильно гидрофобные фазы с высокой степенью покрытия как материал неподвижной фазы

14-30-15:00, Перерыв

15:00-17:00, Вебинар 6

29) пояснение термина: неподвижные фазы с низкой степенью покрытия (low coverage)
30) пояснение некоторых фармакопейных терминов, касающихся колонок для ВЭЖХ
31) проблемы регенерации хроматографических колонок после работы со сложными концентрированными матрицами
32) существенное различие величины площади пика при нескольких инжекциях из одного виала
33) есть ли особенности промывки и консервации колонок после буферных растворов с рH=2,5
34) разработка документа: «проведение контроля по показателю «количественное определение»
35) возможно ли обосновать необходимость работы с двумя навесками стандартов разрешено ли уменьшать количество разведений в методике; проблема сходимости результатов по двум навескам стандартных образцов
36) выбор тары для расфасовки аттестованных стандартных образцов
37) как выбрать длину волны для определения аналита и примеси в одной методике
38) значение функции "sampling rate" в настройках детектора программы Empower (Waters)
39) как поступить при наличии изомерной формы в стандарте
40) возможно ли восстановить старую колонку

Ответы на вопросы в чате
17 июня
9:00-11-30, Вебинар 7

1) как можно толковать отрицательные пики; в чем может быть причина отрицательного пика при работе в фармакопейной методике
2) проблема появления постороннего пика в хроматограмме чистого буфера
3) как корректно рассчитать уровень шума на хроматограмме
4) проблемы, возникающие при переносе методики на другой ВЭЖХ прибор того же производителя
5) проблема аномальной асимметрии пика в ион-парной хроматографии
6) возможно ли уменьшать количество референтных стандартов примесей в рутинной работе
7) допустимо ли изменять количество примесей (в сторону увеличения) в готовой лекарственной форме по сравнению с субстанцией
8) критерии выбора виал и септ к ним
9) если замена колонки на аналогичную недопустима. выбор подходящей колонки
10) как корректно провести пробоподготовку, чтобы не «разбавить» примеси ниже определяемой концентрации
11) проблема с работой насоса в резервуаре «а» при работе в градиентном режиме
12) выбор колонки для разделения аминосоединений и солевой/кислотной формы аналита
13) перегрузка колонки: особенности и возможные проблемы
14) проблема появления постороннего пика на хроматограмме после выхода пика действующего вещества
15) высокая концентрация тетрагидрофурана и материал неподвижной фазы: совместимо ли

11-30-12:30, Перерыв

12-30-14-30, Вебинар 8

16) аномальная асимметрия при определении аналита кислотного характера
17) уменьшение площадей компонентов стандартных образцов и испытуемых растворов. проблемы с воспроизводимостью высоты и площади пиков
18) необходима ли промывка ВЭЖХ системы в начале и конце работы
19) проблемная ситуация: пики низкие и широкие
20) интегрирование пика примеси на «хвосте» основного пика
21) как корректно рассчитать DL и QL согласно требованиям фармакопеи с учетом стандартного отклонения аналитического сигнала
22) подвижные фазы с содержанием водной части 90%: проблемы разделения
23) входной контроль колонок для ВЭЖХ
24) количественное определение родственных примесей в готовой лекарственной форме: ложные результаты
25) разрушение кювет детектора на двух ВЭЖХ приборах
26) Окисление вспомогательного вещества в готовой лекарственной форме: необходимо ли определение образующегося продукта
27) растворение пробы в 100% органическом растворителе: проблемы пробоподготовки

14-30-15:00, Перерыв

15:00-17:00, Вебинар 9

28) раздвоение верхушки пика: возможные причины проблемы
29) необходимо ли фильтровать чистые растворители класса «для ВЭЖХ» и воду для хроматографии
30) регенерация колонки, вышедшей из строя
31) термин «аналогичная хроматографическая колонка»
32) необходимо ли указывать условия интегрирования пиков в ВЭЖХ методиках
33) каковы рекомендуемые критерии приемлемости в методике величины эффективности (ЧТТ) и асимметрии пиков
34) может ли быть ориентиром в методике перечень идентифицируемых примесей из фармакопейных статей
35) проблема искажения формы пика в градиентной методике
36) введение в хроматограф буфера и чистого органического растворителя из разных резервуаров
37) различная величина асимметрии пика при переносе с прибора Шимадзу на Аджилент
38) возможен ли перенос методики, разработанной для рефрактометрического детектора, на ультрафиолетовый
39) различия в хроматограммах при использовании разных типов тетрагидрофурана
40) влияние просроченного химреактива на результаты хроматографического анализа

Ответы на вопросы в чате
Для участия в семинаре просим предварительно зарегистрироваться по e-mail

Шумай Светлана Олеговна: shumay@airko.org